laporan mikrobiologi STERILISASI DAN PEMBUATAN MEDIUM NA (Nutrient Agar)

I.                   PENDAHULUAN

1.1  LATAR BELAKANG

Praktikum yang melibatkan mikroba atau bahan-bahan kimia sebagai bahan eksperimen tentu harus diawali dengan yang namanya sterilisasi. Sterilisasi biasa dilakukan baik pada peralatan-peralatan maupun bahan-bahan yang akan digunakan dalam praktikum khususnya mikrobiologi. Sterilisasi dalam mikrobiologi merupakan suatu cara atau usaha untuk membebaskan alat-alat atau bahan-bahan dari segala macam bentuk kehidupan terutama mikroba agar tidak terkontaminasi dengan bahan lain atau mikroba yang tidak diinginkan. Sterilisasi perlu dilakukan agar dalam praktikum hanya biakan murni saja yang ada tanpa kontaminasi mikroorganisme lain. Biakan murni adalah biakan yang hanya terdapat satu spesies mikroba atau hasil perbanyakan akan satu sel mikroba.

Biakan murni dapat dibuat, medium harus steril sebelum inokulasi, yaitu kita harus yakin bahwa tidak ada organisme hidup berada dalam medium jika di inokulasi. Metode yang lazim digunakan untuk mensterilkan media adalah menempatkan dalam autoklaf. Autoklaf menggunakan uap bertekanan untuk menaikkan suhu barang yang disterilkan sampai suatu taraf yang mematikan semua bentuk kehidupan. Untuk sterilisasi rutin, autoklaf biasanya dioprasikan pada tekanan uap 15 lb/in². Pada tekanan ini suhu menjadi 121^oC, waktu yang diperlukan pada suhu ini adalah 15 menit untuk sterilisasi bahan dan 20 menit untuk sterilisasi peralatan-peralatan, apabila medium berukuran besar disterilkan maka waktu yang diperlukan akan lebih panjang, karena panas memerlukan waktu untuk menembus bahan tersebut. Berdasarkan uraian diatas, maka dilakukan praktikum mengenai Berbagai Teknik Sterilisasi yang bertujuan untuk mengetahui cara sterilisasi dan apa saja yang dilakukan dalam sterilisasi.

Makhluk hidup yang ada di bumi tidak hanya terdiri dari makhluk hidup yang dapat dilihat oleh mata telanjang, tetapi ada juga mikroorganisme yang berukuran kecil dan hanya dapat dilihat dengan menggunakan teknik dan peralatan khusus. Mikroorganisme ( jasad renik) merupakan jasad hidup yang mempunyai ukuran sangat kecil. Mikroorganisme mempengaruhi kehidupan manusia baik secara langsung maupun tidak langsung yang bisa berperan sebagai kawan maupun lawan bagi kehidupan manusia. Mikroorganisme juga merupakan makhluk hidup, untuk memeliharannya dibutuhkan medium yang harus mengandung semua zat yang diperlukan untuk pertumbuhannya antara lain senyawa –senyawa organik (protein, karbohidrat, lemak, vitamin dan mineral)

Mikroorganisme dapat berkembang biak secara alami atau dengan campur tangan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia di antaranya melalui pertumbuhan menggunakan media. Pada pembuatan media ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrien yang diperlukan oleh bakteri dan juga keadaan lingkungan fisik yang dapat menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya.

Pembiakan mikroba secara buatan memerlukan media pertumbuhan untuk menjadi tempat tumbuh dan penyedia nutrien bagi mikroba. Media pertumbuhan terdiri dari garam organik, sumber energi (karbon), vitamin dan zat pengatur tumbuh (ZPT).  Pembuatan media ini dapat pula ditambahkan komponen lain seperti senyawa organik dan senyawa kompleks lainnya.

Alat-alat yang digunakan dalam perkembangbiakan inipun harus ditsterilisasikan terlebih dahulu. Hal tersebut dimaksudkan agar tidak ada organisme lain yang tidak diinginkan tumbuh dalam media tersebut sehingga dapat menghambat pertumbuhan miikroorganisme yang akan dibiakkan dalam media tersebut.

1.2  MAKSUD DAN TUJUAN

Adapun maksud dan tujuan dari praktikum ini, yaitu :

1.      Mengenal persiapan dan pengerjaan teknik sterilisasi alat, bahan dan area kerja untuk pengerjaan mikrobiologi secara aseptis

2.      Mengetahui prosedur pembuatan Medium tumbuh Bakteri

II.    TINJAUAN PUSTAKA

Sterilisasi adalah suatu proses di mana kegiatan ini bertujuan untuk membebaskan alat ataupun bahan dari berbagai macam mikroorganisme. Suatu bahan bisa dikatakan steril apabila bebas dari mikroorganisme hidup yang patogen maupun tidak baik dalam bentuk vegetatif maupun bentuk nonvegetatif (spora) (Subaghdja, 2010).

Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh semua jasad renik yang ada, jika ditumbuhkan di dalam suatu medium tidak ada jasad renik yang dapat berkembang baik. Sterilisasi harus dapat membunuh renik yang paling tahan panas yaitu spora bakteri (Fardiaz,1992).

Adanya pertumbuhan mikroorganisme menunjukkan bahwa pertumbuhan bakteri masih berlangsung dan tidak sempurnanya proses sterilisasi. Jika sterilisasi berlangsung sempurna, maka spora bakteri yang merupakan bentuk paling resisten dari kehidupan mikrobia akan diluluhkan (Lay dan Hatowo, 1992).

Pemilihan cara sterilisasi didasarkan pada sifat bahan yang akan disterilkan. Cara sterilisasi yang umum digunakan secara rutin di laboratorium Mikrobiologi ialah dengan pemanasan. Bila panas digunakan bersama-sama dengan uap air maka disebut sterilisasi panas lembab, bila tanpa kelembaban disebut sterilisasi panas kering atau sterilisasi kering (Ammi, dkk., 2013).

Menurut Ratna (1993), berikut ini adalah jenis proses sterilisasi:

a.       Sterilisasi basah atau sterilisasi panas lembab

Sterilisasi basah biasanya dilakukan di dalam autoklaf atau sterilisator uap yang mudah diangkat (portable) dengan menggunakan air jenuh bertekanan pada suhu 121^oC selama 15 menit. Maka sterilisasi basah dapat digunakan untuk mensterilkan bahan apa saja yang dapat ditembus uap air (misalnya minyak) dan tidak rusak bila dipanaskan dengan suhu yang berkisar antara 110^oC dan 121^oC. Bahan-bahan yang biasanya disterilkan dengan cara ini antara lain medium biakan yang umum, air suling, peralatan laboratorium, biakan yang dibuang, medium yang tercemar, dan bahan-bahan dari karet.

Ada 4 hal utama yang harus diingat bila melakukan sterilisasi basah:

1.      Sterilisasi bergantung pada uap, karena itu udara harus dikosongkan betul-betul dari ruang sterilisator;

2.      Semua bagian bahan yang disterilkan harus terkena uap, karena itu tabung dan labu kosong harus diletakkan dalam posisi tidur agar udara tidak terperangkap di dasarnya;

3.      Bahan-bahan yang berpori atau yang berbentuk cair harus permeabel terhadap uap;

4.      Suhu sebagaimana yang terukur oleh termometer harus mencapai 121^oC dan dipertahankan setinggi itu selama 15 menit.

b.      Sterilisasi kering

Sterilisasi kering atau sterilisasi panas kering dapat diterapkan dengan cara pemanasan langung sampai merah, meayangkan di atas nyala api, pembakaran dan sterilisasi dengan udara panas (oven). Pemanasan kering sering digunakan dalam sterilisasi alat-alat gelas di laboratorium.

Dalam sterilisasi panas kering, bahan yang sering disterilkan adalah pipet, tabung reaksi, cawan petri dari kaca, dan barang-barang pecah belah lainnya. Bahan-bahan yang disterilkan harus dilindungi dengan cara membungkus, menyumbat atau menaruhnya dalam suatu wadah tertutup untuk mencegah kontaminasi setelah dikeluarkan dari oven. Sebelum melakukan sterilisasi udara panas kering ini terlebih dahulu membungkus alat-alat gelas dengan kertas payung atau aluminium foil, setelah itu atur pengatur suhu oven menjadi 160^oC dan alat disterilkan selama 2 jam.

Menurut Ratna (1993), berikut adalah tabel daftar suhu dan waktu yang biasa digunakan untuk sterilisasi panas kering dengan oven:

Suhu (oC)	Waktu (jam)
170	1,0
160	2,0
150	2,5
140	3,0

c.       Sterilisasi uap

Uap panas pada suhu 100^oC dapat digunakan dalam bentuk uap mengalir. Metode ini mempunyai keterbatasan. Penggunaan uap mengalir dilakukan dengan proses sterilisasi bertingkat untuk mensterilkan media kultur. Metode ini jarang memuaskan untuk larutan yang mengandung bahan-bahan karena spora sering gagal tumbuh di bawah kondisi ini, karena bentuk vegetatif dari kebanyakan bakteri tidak membentuk spora. Temperatur suhu titik mati bervariasi, tetapi tidak ada bentuk non spora yang bertahan. Dalam prakteknya, suatu perpanjangan pemaparan uap selama 20-60 menit akan membunuh semua bentuk vegetatif bakteri tapi tidak akan menghancurkan spora. Untuk meyakinkan penghancuran spora, dilakukan sterilisasi bertingkat. Proses ii dilakukan dengan waktu yang bervariasi, dari 20-60 menit setiap hari selama 3 hari. Setiap hari setelah sterilisasi bahan disimpan pada inkubator pada 37^oC. Prinsip dari metode ini adalah pada saat pemaparan pertama, uap membunuh bakteri vegetatif tapi tidak sporanya. Tapi pada saat bahan disimpan pada inkubator atau pada suhu ruangan selama 24 jam, spora akan tumbuh ke dalam bentuk vegetatif. Spora yang telah tumbuh ini akan dimatikan pada pemanasan hari ke dua. Kesuksesan dari proses ini tergantung pada spora yang berkembang ke bentuk vegetatif selama masa istirahat.

d.      Penyaringan (filtrasi)

Penyaringan telah banyak digunakan untuk mensterilkan medium laboratorium dan larutan yang dapat mengalami kerusakan jika dipanaskan. Penyaringan dengan ukuran pori-pori 0,45 mikron atau kurang akan menghilangkan jasad renik yang terdapat di dalam larutan tersebut. Penyaring yang banyak digunakan terbuat dari gelas sinter, selulsa dan asbestos atau penyaring Seitz. Pori-pori dari penyaring tersebut berkiras antara 0,22 sampai 10 mikron. Pori-pori yang lebih kasar biasanya digunakan untuk penjernihan sebelum digunakan pori-pori yang lebih halus, sehingga tidak terjadi penyumbatan. Penyaring yang biasa digunakan untuk bakteri tidak dapat menahan atau menyaring virus atau mikoplasma.

Beberapa contoh bahan yang biasa disterilkan dengan cara ini adalah serum, larutan bikarbonat, enzim, toksin, bakteri, medium sintetik tertentu, dan antibiotik.

Ada beberapa macam filter, yaitu:

1.      Filter Swinny

Sebuah adaptasi dari filter seitz, filter swinny mempunyai adaptor khusus yaitu terdiri dari lapisan asbes, bersama dengan layer dan pencuci. Keutamaan untuk digunakan filter swinny dibungkus dengan kertas dan autoklaf. Bagian yang dipotong dihubungkan pada spoit werlock dan cairan dimasukkan ke potongan asbes dengan menggunakan tekanan pada sal spoit.

2.      Filter Fritted-Glass

Permeabilitas dari filter berbanding lurus dengan ukurannya. Setelah potongan dibentuk, potongan disegel dengan pemanasan di dalam gelas pirex seperti corong buhcner.

3.      Filter Berkefeld dan Mandler

Mandler terbuat dari tanah silika murni, asbestos dan kalium sulfat. Berkefeld juga tersusun dari tanah silika murni. Masing-masing filter bermuatan negatif.

4.      Filter Selas

Filter ini secara kimia bersifat resisten terhadap semua larutan yang tidak menyerang silika.

5.      Filter Candles-Pasteur-Chamberland

Terbuat dari pori porselen tak berkaca dengan pori kecil yang menghasilkan filtrasi lambat.

e.       Sterilisasi dengan desinfektan

Desinfektan adalah zat yang dapat membunuh bakteri. Senyawa kimia yang banyak digunakan sebagai esinfektan antara lain: larutan AgNO₃, CuSO₄, HgCl₂, ZnO, serta alkohol dan campurannya. Zat-zat yang dapat membunuh atau menghambat pertumbuhan bakteri dapat dibagi atas garam-garam, logam, fenol, dan senyawa-senyawa lain yang sejenis, formaldehida,yodium, alkohol, klor, zat warna, detergen, sulfonamida, dan antibiotik. Umumnya bakteri yang muda kurang daya tahannya terhadap desinfektan daripada bakteri yang tua. Kepekatan, konsentrasi dan lamanya berada di bawah pengaruh desinfetan merupkan faktor-faktor yang berperan dalam sterilisasi jenis ini.

f.       Sterilisasi gas

Sterilisasi gas digunakan dalam pemaparan gas atau uap untuk membnih mikroorganisme dan sporanya. Beberapa bahan kimia yang dapat digunakan untuk sterilisasi gas adalah etilena oksida, asam parasetat, formaldehida dan glutaraldehida alkalin. Cara ini diterapkan pada suhu kamar selama 2-18 jam tergantung pada bahan kimianya. Hal-hal yang perlu diperhatikan dapat sterilisasi gas antara lain:

1)      Lamanya waktu yang diperlukan sesudah perlakuan untuk menghilangkan semua sisa bahan kimia yang digunakan;

2)      Daya bahan bakar yang bersangkutan;

3)      Persyaratan peralatan;

4)      Biaya pelaksanaan.

g.      Sterilisasi dengan radiasi

Sterilisasi dengan radiasi dapat dilakukan dengan sinar gamma (sinar UV kadang juga digunakan tetapi tidak begitu baik karena daya tembusnya lemah) namun penggunaannya terbatas karena menuntut persyaratan keamanan dan biaya tinggi.

Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dan dikembangkan pada suatu substrat yang disebut medium. Medium yang digunakan untuk menumbuhkan dan mengembangbiakkan mikroorganisme tersebut harus sesuai susunannya dengan kebutuhan jenis-jenis mikroorganisme yang bersangkutan. Beberapa mikroorganisme dapat hidup baik pada medium yang sangat sederhana yang hanya mengandung garam anorganik ditambah sumber karbon organik seperti gula. Sedangkan mikroorganisme lainnya memerlukan suatu medium yang sangat kompleks yaitu berupa medium ditambahkan darah atau bahan-bahan kompleks lainnya (Volk,1993).

Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat hara (nutrien) yang berguna untuk membiakkan mikroba. Dengan menggunakan bermacam-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan, pengujian sifat fisiologis dan perhitungan sejumlah mikroba. Supaya mikroba dapat tumbuh baik dalam suatu media, maka medium tersebut harus memenuhi syarat-syarat, antara lain:

1. harus mengandung semua zat hara yang mudah digunakan oleh mikroba,
2. harus mempunyai tekanan osmosis,
3. tegangan permukaan dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba yang akan tumbuh,
4. tidak mengandung zat-zat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba,
5. harus berada dalam keadaan steril sebelum digunakan, agar mikroba yang ditumbuhkan dapat tumbuh dengan baik (Sutedjo, 1991).

Saat ini media agar merupakan media yang sangat umum digunakan dalam penelitian-penelitian mikrobiologi. Media agar ini memungkinkan untuk dilakukannya isolasi bakteri dari suatu sampel, karakterisasi morfologi, sampai penghitungaan bakteri yang dikenal dengan nama total plate count. Bentuk koloni bakteri dan warna-warninya mudah sekali dikenali dengan media ini dengan cara mengubah komposisi nutrien atau menambahkan indikator. Komposisi media bakteri dapat dimodifikasi sehingga dapat digolongkan menjadi media umum, media selektif (bakteri tertentu saja yang dapat tumbuh) dan media diferensial (bakteri tumbuh dengan memberikan ciri-ciri tertentu) (Achmad, 2007).

Agar-agar, gelatin atau gel silika merupakan bahan untuk membuat medium menjadi padat. Namun, yang paling umum digunakan adalah agar-agar. Meskipun bahan utama agar-agar adalah gelatin, yaitu suatu kompleks karbohidrat yang diekstraksi dari alga marin genus Gelidium, namun sebagian besar mikroorganisme tidak dapat menggunakannya sebagai makanan sehingga agar-agar dapat berlaku hanya sebagai pemadat (Hadioetomo, 1993).

Media dapat digolongkan berdasarkan bentuk, susunan kimianya, dan fungsinya. Berdasarkan bentuknya terdiri dari media padat, media semi padat, dan media cair. Bahan makanan yang dbutuhkan mikroorganisme dibagi menjadi tujuh golongan yaitu air, sumber energi, sumber karbon, sumber aseptor elektron, sumber mineral, faktor tumbuh, dan sumber nitrogen (Pujiati, 2012).

Menurut Pelczar (1996), klasifikasi medium berdasarkan fungsinya digolongkan menjadi 7 golongan, yaitu:

1.      Medium umum, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan yang bertujuan menstimulasi pertumbuhan mikroba secara umum. Contoh: Nutrien Agar (NA) untuk menstimulasi pertumbuhan bakteri, Potato Dextose Agar (PDA) untuk menstimulasi pertumbuhan fungi.

2.      Medium khusus, merupakan medium untuk menentukan tipe pertumbuhan mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan perubahan-perubahan kimia tertentu. Contoh: medium tetes tebu untuk Saccharomyces cerevisiae.

3.      Media diperkaya (enrichment media), merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu untuk menstimulasi pertumbuhan mikroba yang diinginkan. Hal ini dilakukan untuk menstimulasi pertumbuhan mikroba yang jumlahnya sedikit dalam suatu campuran berbagai mikroba. Contoh: Chocolatemedia dan Yeast-Extract-poptasium Nitrat Agar.

4.      Media selektif, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan tertentu yang akan menghambat pertumbuhan mikroba yang tidak diinginkan yang ada dalam suatu spesimen. Inhibitor yang digunakan berupa antibiotik, garam dan bahan-bahan kimia lainnya.

5.      Media differensial, merupakan media yang ditambahkan bahan-bahan kimia atau reagensia tertentu yang menyebabkan mikroba yang tumbuh memperlihatkan perubahan-perubahan spesifik sehingga dapat dibedakan dengan jenis lainnya.

6.      Medium penguji (Assay medium), merupakan medium dengan susunan ertentu yang digunakan untuk pengujian senyawa-senyawa tertentu dengan bantuan bakteri. Contoh: medium untuk menguji vitamin-vitamin, antibiotik, dan lain-lain.

7.      Medium perhitungan jumlah mikroba yaitu medium spesifik yang digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan. Contoh: medium untuk menghitung jumlah bakteri E. Coli air sumur.

Medium harus mengandung nutrien yang merupakan substansi dengan berat molekul rendah dan mudah larut dalam air. Nutrien ini adalah degradasi dari nutrien dengan molekul yang kompleks. Nutrien dalam medium harus memenuhi kebutuhan dasar makhluk hidup, yang meliputi air, karbon, energi, mineral dan faktor tumbuh (Label, 2008)

NA (Nutrien Agar) adalah medium yang digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri. Nutrient agar adalah medium yang diklasifikasikan sebagai medium sintetik terstruktur karena tersusun oleh komponen yang pasti jenis dan kuantitasnya. NA di buat dengan komposisi agar–agar yang sudah dipadatkan sehingga NA juga bisa disebut sebagai nutrisi padat yang digunakan untuk menumbuhkan bakteri. Fungsi agar–agar hanya sebagai pengental namun bukan zat makanan pada bakteri, agar dapat mudah menjadi padat pada suhu tertentu. Medium Nutrient Agar adalah salah satu medium padat yang memiliki komposisi yaitu agar–agar yang telah di panaskan dan mencair dengan suhu 95⁰C (Sandra, 2013).

III.             METODOLOGI

3.1  WAKTU DAN TEMPAT

Percobaan ini dilakukan pada hari Selasa, tanggal 11 April 2017, pukul 10.00 WIB sampai selesai, bertempat di laboratorium biologi FATETA UNJA.

3.2  ALAT DAN BAHAN

Adapun alat dan bahan yang diperlukan selama proses praktikum pembuatan Medium NA ini, dengan peralatan yang diperlukan anatara lain :

A.    ALAT

1.      12 Erlenmeyer 250 ml, 10 erlenmeyer 500 ml

2.      Bunsen

3.      Hot plate

4.      Stirrer

5.      3 Batang pengaduk

6.      50 Cawan petri

7.      40 Tabung reaksi

8.      3 Rak tabung reaksi

9.      Autoklaf

10.  Oven

11.  3 Pipet volumterik

12.  Botol semprot alcohol

B.     BAHAN

1.      Aquades

2.      NA (Nutrient Agar)

3.      Kapas

4.      Alumunium foil

5.      Plastic wrap

6.      Tissue

7.      Kertas label

8.      Kertas pembungkus

9.      Alcohol 70%

10.  Spritus

3.3  SKEMA KERJA

·         Pembuatan Medium NA

Cara kerja :

1.      Timbang media NA sesuai prosedur di kemasan ( catatan : buatlah 250 ml media NA untuk setiap shift praktikum). Penimbangan media dilakukan secara teliti dan cepat, kemudian serbuk media dimasukkan secara hati – hati ke dalam Erlenmeyer.

2.      Tambahkan aquades dan aduk sampai merata dengan batang pengaduk

3.      Panaskan dengan hati – hati menggunakan penangas/elemen pemanas sampai media tercampur homogeny (ditunjukkan dengan warna kuning jernih). Perhatian : sewaktu pemanasan jangan sampai terbentuk buih berlebihan sampai meluap.

4.      Sterilisasi media dalam Erlenmeyer tersebut dengan menggunakan autoklaf : 1) buka tutup autoklaf, 2) Masukkan air ke dalam autoklaf hingga penanda batas air, 3) Tempatkan bahan/medium ke dalam autoklaf, susun rapi, 4) Tutup autoklaf, putar kunci dengan kencang, 5) Nyalakan autoklaf dan tunggu hingga suhu mencapai 121 ͦC dan tekanan sebesar 1 atm/15 lb (kondisi sterilisasi), jangan lupa menutupkatup autoklaf, 6) Mulai sterilisasi selama 15 menit, 7) Setelah selesai matikan autoklaf, 8) Tunggu hingga tekanan turun hingga 0 atm (suhu agak dingin), 9) Buka secara hati – hati penutup autoklaf, 10) Keluarkan alat dan medium dari dalam autoklaf.

5.      Medium yang telah siap dan tidak akan segera digunakan, sebaiknya disimpan di dalam lemari/ruang pendingin dengan suhu 10 ͦC untuk mencegah terjadinya kontaminasi.

·         Sterilisasi alat

Cara kerja :

1. Bungkus rapi alat-alat gelas yang akan disterilkan dengan kertas pembungkus/aluminium foil.

2. Strelisasi dengan open : 1). Buka pintu oven, 2). Tempatkan alat ke dalam oven dengan susunan rapi, 30. Tutup pintu oven, 4). Setting suhu oven : 160-180 ͦC selama 1-3 jam, 5). Mulai strelisasi, 6). Setelah selesai, matikan oven, 7). Tunggu  beberapa saat segingga suhu turun, 8). Keluarkan alat dari oven.

·         Strelisasi area kerja

Cara kerja :

1. Bersihkan meja atau alat dari bahan yang ada di atasnya.

2. Usap bersih dengan mennggunakan tisu.

3. Semprot merata dengan alcohol dengan 70%

4. ratakan dengan tisu bersih

5. Tunggu hingga kering

6. Nyalakan bunsen

IV.             HASIL DAN PENGAMATAN

4.1  HASIL

(A)                                                     (B)                                                       (C)

Keterangan :

A.    Media NA saat di hot plate

B.     Media NA dituangkan pada Erlenmeyer sebanyak 187 ml

C.     Media NA disimpan di dalam kulkas

4.2  PEMBAHASAN

Sterilisasi merupakan suatu proses (kimia dan fisika) yang membunuh semua bentuk hidup terutama mikroba. Sterilisasi yang dilakukan bertujuan untuk menghindari kontaminasi, yaitu masuknya mikroorganisme yang tidak diinginkan. Alat yang akan digunakan dalam suatu penelitian atau praktikum harus disterilisasi terlebih dahulu untuk membebaskan semua bahan dan peralatan tersebut dari semua bentuk kehidupan.

Ada empat cara yang sering digunakan dalam sterilisasi dengan pemanasan, yaitu sterilisasi dengan pemijaran, dengan udara panas (kering), dengan uap panas dan sterilisasi dengan air panas bertekanan. Sterilisasi dengan pemijaran dilakukan dengan cara memijarkan pada api lampu spiritus (mengusahakan pada api bagian tengah yang berwarna kebiruan). Teknik pemijaran ini dilakukan untuk alat jarum inokulasi, ose atau alat lain yang terbuat dari platina atau nikhrom. Sterilisasi dengan udara panas menggunakan oven (Hot Air Sterilizer).

Pada percobaan ini alat yang digunakan untuk mensterilkan alat yaitu oven, bunsen dan autoklaf. Oven merupakan alat sterilisasi dengan cara fisik yaitu panas kering. Oven (Hot Air Sterilizer), digunakan untuk mensterilkan alat yang terbuat dari kaca dan kertas yang tahan terhadap suhu tinggi. Alat – alat yang akan disterilisasi dengan oven, menggunakan temperatur 170 – 180 ͦC selama 1 – 2 jam.

Alat lain yang digunakan dalam sterilisasi adalah autoklaf. Autoklaf yang berfungsi untuk sterilisasi dengan uap panas bertekanan. Sterilisasi dengan autoklaf diperlukan panas basah selama 15 menit pada temperatur 121^oC dan dengan tekanan 2 atm. Sterilisasi lain yaitu menggunakan Bunsen. Bunsen digunakan untuk sterilisasi dengan cara pemanasan, misalnya untuk membakar jarum ose.

Selain itu, dalam pengerjaan hal-hal yang berkaitan dengan mikroorganisme, bukan hanya alat yang perlu disterilkan, tetapi juga telapak tangan kita agar tidak melakukan kontaminasi terhadap alat-alat yang kita pegang. Untuk itu digunakan alkohol yang disemprotkan dengan hand sprayer. Alkohol disemprotkan secukupnya, kemudian kita harus memastikan seluruh permukaan telapak tangan telah terbalut alkohol. Hal ini dilakukan agar telapak tangan kita benar-benar steril.

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba. Selain untuk menumbuhkan mikroba, medium dapat pula untuk isolasi, memperbanyak mikroba, pengujian sifat – sifat fisiologi dan perhitungan mikroba.

            Dalam praktikum kali ini medium yang digunakan adalah NA (Nutrient Agar). NA digunakan untuk media pertumbuhan bakteri. Pembuatan media ini diawali dengan melarutkan 15 gram NA pada 750 ml aquades pada gelas ukur, setelah itu di masukkan stirrer dalam larutan tersebut lalu ditutup dengan alumunium foil, setelah itu memanaskannya diatas hot plate diikuti oleh pengadukan, pengadukannya menggunakan stirrer, tujuan dari pemanasan dan pengadukannya adalah untuk mempercepat pelarutan dari NA. Kemudian setelah larut didiamkan beberapa menit agar panasnya berkurang lalu larutan medium tersebut di masukkan ke dalam Erlenmeyer sebanyak 187 ml lalu ditutup dengan kapas dan alumunium foil dan direkatkan dengan plastic wrap kemudian dimasukkan ke dalam autoklaf dengan temperature 121 ͦC dalam waktu 15 menit dan dengan tekanan 2 ATM yang mana masih dalam kondisi tertutup dengan alumunium foil. Tujuan dari penutupan untuk menjaga larutan NA dari kontaminasi dari luar.

V.                PENUTUP

5.1  KESIMPULAN

Berdasarkan praktikum yang dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa, Sterilisasi merupakan suatu proses (kimia dan fisika) yang membunuh semua bentuk hidup terutama mikroba. Sterilisasi yang dilakukan bertujuan untuk menghindari kontaminasi, yaitu masuknya mikroorganisme yang tidak diinginkan. Pada percobaan ini alat yang digunakan untuk mensterilkan alat yaitu oven, bunsen dan autoklaf.

Medium adalah suatu bahan yang terdiri atas campuran nutrisi yang digunakan untuk menumbuhkan mikroba. Selain untuk menumbuhkan mikroba, medium dapat pula untuk isolasi, memperbanyak mikroba, pengujian sifat – sifat fisiologi dan perhitungan mikroba.

Medium yang digunakan pada praktikum ini yaitu NA (Nutrient Agar). NA (Nutrien Agar) adalah medium yang digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri. NA terdiri dari daging yang berfungsi sebagai sumber energy. Agar berfungsi untuk memadatkan medium NA.

5.2  SARAN

Pada praktikum yang telah dilakukan, sebagai saran dari praktikan yaitu sebaiknya penuntun praktikum jangan diberikan 2 atau 3 hari sebelum praktikum agar praktikan dapat mempelajarinya. Diharapkan pada praktikum selanjutnya dapat berjalan lebih baik lagi.

DAFTAR PUSTAKA

Achmad, D,. 2007, Media Agar. Ide Besar Istri Peneliti,, Erlangga: Jakarta

Ammi, Yanti dan Kusnadi, 2013, Petunjuk Praktikum Mikrobiologi, IPBexpres, Bogor.

Fardiaz, 1992, Mikrobiologi Pangan, Gramedia Pustaka Utama, Jakarta.

Hadioetomo, RS, 1993, Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium Mikrobiologi.  Gramedia:Jakarta

Label, J. 2008, Mikrobiologi : Pembuatan Medium, Erlangga : Jakarta.

Lay dan Hatowo, 1992, Analisis Mikroba di Laboratorium, Raja Grafindo Persada, Jakarta.

Pelczar, 1996, Dasar-Dasar Mikrobiologi, Universitas Indonesia, Jakarta.

Pujiati. 2012. Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Dasar. Madiun: Ikip PGRI Madiun Press.

Ratna, 1993, Mikrobiologi Dasar, Gramedia, Jakarta.

Sandra, 2013, Mikrobiologi Umum, Erlangga : Jakarta.

Subaghdja, Rickie, 2010, Sterilisasi dan Pengenalan Alat Mikrobiologi, Yudistira: Bandung

Sutedjo, 1991, Mikrobiologi Tanah, Rineka Cipta: Jakarta

Volk & Wheeler, 1993, Mikrobiologi Dasar Jilid 1 Edisi kelima, Erlangga:  Jakarta